Народный артист России Николай Исаакович Пастухов родился 13 мая 1923 года в городе Сураж Брянской области.

Еще до войны впервые пришел в Театр Красной (Советской, Российской) Армии. Затем учился в Театральном училище им. М. С. Щепкина (1941), но обучение так и не окончил.

В 1942 году ушел добровольцем на фронт. Воевал сначала в 10-й танковой бригаде, а после ранения — в музыкальном взводе 308-й латышской дивизии.

После войны работал в Тамбовском драматическом театре им. А.В. Луначарского.

В 1953 году вновь пришел в Театр Армии. В 1955 году сыграл свою первую большую роль — летчика Алексея Мересьева в спектакле "Настоящий человек" по повести Бориса Полевого.

В 1957-1958 годах работал в театре "Современник".

В 1958 году вернулся в Театр Армии, где выходил на сцену до 2012 года.

Среди театральных работ Пастухова — Телегин-Вафля ("Дядя Ваня"), Кэлин Абабий ("Святая святых"), Муромский ("Свадьба Кречинского"), Тихон ("Бесы"), Отец Франциск ("Много шума из ничего"), Костылев ("На дне") и др.

В кинематографе актером было создано более 30 образов. Он снимался в фильмах "Станционный смотритель", "Леди Макбет Мценского уезда", а также в нескольких фильмах Никиты Михалкова: "Свой среди чужих, чужой среди своих", "Раба любви", "Неоконченная пьеса для механического пианино". В 1990-2000-х годах снялся в сериалах "Петербургские тайны", "Марш Турецкого", "На углу у Патриарших —3" и др.

Лауреат Всесоюзного кинофестиваля в номинации "Призы за актёрскую работу" (1976).

Лауреат премии "Золотая маска" (2005).

Отмечен медалью имени А.Д. Попова (1978).

Николай Пастухов скончался в Москве 23 мая 2014 года, на 92 году жизни.